抗体将成为您在科研及生产中的得力助手
发布日期:2016-07-27 作者:江苏秉宏生物科技有限公司 点击:
抗体孵育一抗:
A. 先将需要检测的抗体准备好,并决定好它们的稀释度。
B. 配好5%的Milk(TBST溶解),按要求稀释好抗体,注意,如需高比例稀释,最好采用梯度稀释。
C. 将稀释好的抗体和膜一起孵育,一般采用RT 1小时,可根据抗体量和膜上抗原量适当延长或缩短时间。
注意:为了便于后面分析结果,我们一般会选用已确定分子量大小而且纯度高的抗体作为marker与一抗同时孵育。
抗体pH的应用范围及选择:
抗原修复液的pH非常重要,有效的抗原修复pH要比修复液的化学成分更重要,同样的修复液随着pH的升高染色的强度逐渐增强,但最佳pH范围为6.0-10.0,目前大家公认的最好的抗原修复液是pH6.0的柠檬酸盐缓冲液和pH8.0的EDTA缓冲液,作为通用修复液碱性pH的修复液要比酸性的有效,而对固定很长时间旧的存档组织,酸性pH的修复液则优于碱性的修复液。